张书义 翻译整理

资料来源：美国乳粉研究所1971年出版的《乳粉定级标准及分析方法》第916号公报。

区别方法：

一般情况下，对于脱脂乳粉热处理程度进行级别的规定是被忽略的，但对于有不同风味要求的脱脂粉来说，确有着实际重要意义。

标准如下：

        级别……………………乳 清 蛋 白 质

        高温脱脂粉…………   ≤1.5mg/g

低温脱脂粉…………   ≥6.0 mg/g

中温脱脂粉…………    1.5～5.99 mg/g

检验方法：

脱脂奶粉中未变性乳清蛋白的检测

参见 《乳品科学报》1959年42卷第28版中，由Kuramot   Jenness  Coulter和Choi所著的哈姆雷特?艾思沃尔分析法之修正版。

一．仪器和试剂

试管…………25×150?，配有Pyrex或Kimax无沿试管，或熟玻璃管。

漏斗…………短颈漏斗直径为50?，颈长65?

短颈漏斗直径为90?，颈长65?

滤纸…………S型和S??602型，直径9?

S型和S??605型，直径15?

褶型滤纸

比色皿………精致圆状的比色皿   19×50?（Coleman仪器公司制）

吸管………Ostwald?Folin型吸管，1ml、2 ml、3 ml、4 ml、和5 ml、以及5 ml、10 ml、20 ml、和100 ml吸管

天平…………用来称取2g脱脂奶粉样品，用Torsion天平（精度±0.1g）来称取盐类和20g脱脂粉样品。

水浴…………温度可控制在37℃（±1℃）

比浊计…………实验室内所用的那种单机型

饱和氯化钠…………称取干酪或奶油所用的盐1?加入到2升蒸馏水中，并混匀加热到接近沸腾状态，全过程配备频率搅拌以确保达全饱和状态，然后冷却到室温，用S型和S?605型，褶状滤纸过滤，切不可用结块Nacl制备饱和溶液。

Hcl溶液（10g/100ml）…………将23 ml浓缩的化学纯Hcl试剂，加入到77 ml蒸馏水中。

标准参照样品………低温脱脂粉和高温脱脂粉（可从美国奶粉研究所获取）

标准比浊计（悬液计）………N?78型，（Coleman仪器公司制）

二、分析步骤

用含有2g脱脂粉的20ml蒸馏水，装入25×150?的试管中，加入8g的Nacl，塞紧管口中，置于37℃水浴中保持30分钟。前15分钟内要振荡试管8至10次，以确保在水浴过程中，使样品与Nacl完全混合并饱和。

不须冷却，以便摇动上述混合物即可倾倒出，用S型和S?602型9?滤纸过滤。如果第一遍滤液仍混蚀，可用同样方式再滤一次，滤取约5ml滤液即可。

用吸管吸取1ml上述滤液，移入比色皿管中，加入10ml饱和Nacl溶液稀释。用橡胶塞塞住比色皿管口，慢慢翻转一下比色皿。

加入2滴Hcl溶液（用5ml的移液管操作），使其变得混浊。塞紧比色管口，慢慢地翻转2次，使酸与加盐的滤液混合，且要小心操作防止产生泡沫。

在加入酸液后的5至10分钟内，再次翻转比色皿一次，用比浊计以420毫微米波长测读浊度值。用原来已加入10ml饱和Nacl溶液而被稀释的游离酪蛋白滤液为基准液，调节比浊计传递率为100%（即为调“0”操作?译者注）。

每种滤液皆以相同方式操作，进行传递率读取，并从标准曲线获取乳清蛋白氮的数值。以相同方式得出平均值，并报告出每克脱脂粉中乳清蛋白氮的毫克数。

在2%的传递率之内，样本应视为一致性。若是不一致，应比较分析四个测定值的平均值用于最终值。

三、标准曲线的制备

分别称量20g（±0.1g）标准的低温脱脂粉和高温脱脂粉，以精确的200ml蒸馏水溶解后，盛于500ml三角瓶中。

称量80g Nacl分别加入上述奶液中，塞紧瓶口摇荡1分钟，然后在37℃水溶中保持30分钟。在前15分钟中，摇荡三角瓶8～10次，以确保完全饱和化，在培育期间使未变性蛋白充分保留下来。

只要能够可倾倒出来，上述混合物就无需冷却和搅拌。用S和S?605型褶型滤纸过滤混合物。如果第一次过滤后，滤液仍呈混浊状，可用同样滤纸再进行第二次过滤，滤液可收集到约100ml即可。在过滤时应用玻璃板盖住漏斗，以防过度蒸发水份。

用吸管将低温和高温脱脂粉之滤液按下序，分别移入25*150mm试管中。

每个试管编号   低温脱脂粉(ml)  高温脱脂粉(ml)

    1             +10              +0

    2             +8               +2

    3             +6               +4

    4             +4               +6

    5             +2               +8

6             +0              +10

塞紧试管口，慢慢翻转试管两次，使混合液充分混匀。用吸管分别吸取1ml上述各管中混合滤液,移入比色皿中，后加入10ml饱和Nacl溶液进行稀释，按前面所述方法分别测定其浊度值。

用坐标纸绘制标准曲线，以横坐标为每克样品的乳清蛋白值，纵坐标为实测的传递率，且参照8～11页所述图表值（1mg近似值为1，10%传递率视为1）。低温粉和高温粉的传递率之基本差异，至少在35%以上。

借助比浊计的标准（N?78型，Coleman仪器公司制），要不断地校准仪器的重复性。